第十题，实验设计题。请同学们阅读一篇材料。

核酸限制性内切酶是重组DNA技术中最重要的工具酶之一，它是一类能识别双链DNA中特定碱基序列，内切方式水解DNA链的核酸水解酶。最适合基因工程操作的限制内切酶为第二类内切酶，这类酶的一个重要特点是切割的断裂点都在反转重复序列上，亦称回文式序列，如：

EcoR I

5’-G↓AATT C-3’

3’-C TTAA↑G-5’

BamH I

……

请设计一个质粒DNA的限制性内切酶酶解鉴定实验。

‘还好我做过核酸的其他实验，这个核酸限制性内切酶的实验设计，编吧！’

兰杰并没有亲手做过限制性内切酶的实验，他也很想做啊，然而限制内切酶是昂贵的生化试剂，教练不给他做。

这个时候，兰杰只能依靠类似实验的操作经历及丰富的理论知识储备，进行合理的编排。

第一步，酶切反应。

第二步，电泳凝胶板的制备。

第三步，电泳加样。

第四步，电泳与鉴定。

兰杰首先设计出四个主要的实验步骤。

需要的实验材料包括：质粒DNA、反应缓冲液、BSA、限制性内切酶……

需要的实验器材包括：电泳槽与电泳仪、紫外检测仪、电热恒温水浴箱……

然后就是细化每一个步骤，写出具体的实验操作细节。

‘设计完了，理论上应该是可行的。’

兰杰从头到尾检查一遍试卷，刚检查完，铃声响起，交卷。

明天将进行实验考试，雷天刚对他的队员们说：“理论考试自我感觉良好的同学，可以和我们教练团队沟通一下理论考试的情况。自我感觉一般的同学，你们回宿舍好好休息，调整状态，积极备战明天的实验考试。”

雷天刚说罢，有一半的队员回去休息了，剩下的一半队员跟教练们对答案。

“对对对！我是这么写的！”

“哈哈！我又做对一题！”

“啊？错了？”

“又错了？”

“第六题之后，我全错？”

“我特么心态崩了啊！”

……

在竞赛尚未全部结束的时候对答案，存在一定风险。

自我感觉良好的同学对完答案后发现准确率较高，他们的自我感觉当然会更加良好，信心和士气倍增，有利于明日的实验赛。

反之则炸裂。

“这么看来，我的理论分数不会低于95分？”对完理论题的答案之后，兰杰发现他的感觉蛮准确的啊，如果能获得不低于理论分95%的分值，就非常可观。

“而我的理论分不会高于50分，我扑街了，我不想参加实验赛了……”高二的某位队员唉声叹气，心情极为低落。

能入选羊中生竞队的学生都是生物领域的尖子生，正常情况下，这些尖子生交了卷，在没有对答案之前，对于自己分数的估值基本上是八九不离十。

对完答案，实际值是预期值的80%~90%，这很常见，大部分学生的估分准确率在这个区间内。

估90分，考了30分。或者估30分，考了90分。这两种极端情况都很少见。

羊中生竞队的这位高二学生考完了理论题，自我感觉极其良好，他自我感觉能考到90分，对完答案后发现，他的实际值有很大概率不会超过50分。

高二的学弟还是太年轻，年轻人富于激情、持有乐观心态是好事，但被过量的激情冲昏了头脑或盲目乐观，就会伤到自己。

兰杰劝慰道：“学弟，你读高二的时候就入选了我们羊中生竞队，来到国决赛场，已经很了不起了。你明年还有机会，并且我坚信，你明年一定会变的更强。所以你一定要振作起来，我们羊中的学生输分不输人，你必须参加明天的实验赛，这是一次宝贵的经历。你明年再来国决赛场，那就是有实战经验的老将了。”

“兰杰学长，你讲的很对，我刚才也就是说说气话，我肯定要参加明天的实验赛。一方面是积累国决经验，另一方面，万一其他选手的实验赛发挥失常，而我超水平发挥，那我就有机会翻盘呀！”年轻人毕竟是年轻人，从乐观到悲观，再由悲观回归乐观，不过是几秒钟的事情而已。再度乐观的高二学弟并未放弃希望，他寄希望于其他选手犯错误、给机会。

兰杰乐了：“哈哈，学弟你能这么想，可太正确了！你就等着吧，等待其他选手给机会。我相信，一定会有人给机会的。”

学科竞赛是个人秀，主办方颁发的只有个人奖项。

某某省或某某中学拿了几个奖，谁家的竞赛实力最强，那是非官方性质的民间统计。

每年的生竞国决按比例颁发六七十个国一奖，平均到每个省，也就两个国一奖。

每个省有那么多所中学、那么多个学生，所以拿到国一奖是很难很难的。

竞争对手不仅仅只有外校或外省的学生，就说兰杰他们的羊中生竞队吧，兰杰与羊中其他同学是队友，同时也是竞争对手。

国决又不计算团队总分，这意味着队友并没有什么价值。

作为竞争对手，队友的价值反而更高。

讲道理，没人愿意逆风。但因为上半场发挥的很差，不得已陷入逆风局，这也经常发生。

逆风的选手，全都希望逆风翻盘。高二学弟是这种人，类似高二学弟的选手有不少。

暂时处于顺风局的兰杰，他当然不会给机会让逆风方翻盘。

次日，实验赛。

实验赛的满分是100分，与理论赛持平。

精神抖擞的兰杰来到指定的实验室，检查他的个人实验器材与实验试剂。

离心机、电泳槽、制胶板（琼脂糖凝胶由主办方提前制好）、染色液、乳胶手套，移液枪4支、枪盒、质粒提取的有关试剂、拓扑异构酶（0.5U/ul）、10*loading buffer、Marker DNA、酶的工作液、蒸馏水……这些是兰杰的个人实验器材与实验试剂。

公用器材是微型紫外分光光度计、水浴锅、紫外成像仪。

实验要求选手们提取所给菌的质粒，设计实验，验证拓扑异构酶I的作用，写出简要的实验设计思路，明确说明每个体系中溶液的配比……

这个分子生物学的实操实验，与昨天理论赛的最后一道实验设计题，有一定的相似之处啊！理论赛、实验赛是有关联的，国决的出题老师水平就是高呀。兰杰立即开始设计实验，他没有做过一模一样的实验，但在羊中的生物实验室，他做过原理相同、具体操作高度类似的实验。